Immunohaematological and rheological parameters in canine visceral leishmaniasis / Parâmetros reológicos e imunohematológicos na leishmaniose visceral canina

Abstract The aim of this study was to find correlations between haematological and rheological parameters in canine visceral leishmaniasis (CLV). Enrolled dogs with CVL (n=31) had a confirmed diagnosis using the rapid test Dual Path Platform (TR DPP®) kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assay. A control group (n=31) comprised healthy dogs with negative results for the TR DPP® kit and PCR assay. Haematological parameters and total protein, albumin, globulin, and antibody were assessed. The rheological properties of the blood samples were also determined. Erythrocytes, haematocrit and platelet values of dogs in the CVL group were found to be lower than those of the control group. The total protein, globulin and IgG concentrations were higher in serum samples from the CVL group. The blood flow curve demonstrated increased shear rates in the CVL group. The viscosity of the blood from the infected animals was lower than in the healthy dogs. A positive correlation was found between erythrocyte numbers and blood viscosity. These data suggest that changes in the flow curve and viscosity of blood as well as the erythrocyte values may be a viable low-cost alternative for the monitoring of dogs with visceral leishmaniasis.

Resumo O objetivo deste estudo foi encontrar correlações entre parâmetros hematológicos e reológicos na leishmaniose visceral canina (LVC). Cães com LVC (n=31) tiveram diagnóstico confirmado de LVC pelo teste rápido imunocromatográfico (TR DPP®) e o ensaio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Cães saudáveis ​​ negativos para o TR DPP® e PCR foram alocados no grupo controle (n=31). Foram avaliados parâmetros hematológicos, proteínas totais, albumina, globulina, anticorpos e as propriedades reológicas do sangue. Os valores de eritrócitos, hematócrito e plaquetas de cães do grupo LVC foram menores do que os encontrados no grupo controle. As concentrações de proteína total, globulina e imunoglobulina G (IgG) foram maiores em amostras de soro do grupo LVC. A curva do fluxo sanguíneo apresentou maior taxa de cisalhamento no grupo LVC. A viscosidade sanguínea dos animais infectados foi menor do que a viscosidade do sangue dos animais do grupo controle. Uma correlação positiva foi encontrada entre o número de eritrócitos e a viscosidade do sangue. Esses dados sugerem que as mudanças na curva de fluxo e viscosidade do sangue, bem como os valores de eritrócitos, podem ser uma alternativa viável e de baixo custo para o monitoramento de cães com leishmaniose visceral.

Estudo piloto sobre imunomodulação na leishmaniose visceral murina: bloqueio da sinalização de IL-10 e uso de IL-1 / Pilot study on immunomodulation in murine visceral leishmaniasis: blockade of IL-10 signaling and use of IL-12

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecto-parasitária e é considerada negligenciada, segundo a organização mundial de saúde. O cão e o homem fazem parte da manutenção do ciclo da infecção. O crescente aumento de animais infectados acarreta em um problema de saúde pública, pois representa eminente risco de infeção para os humanos. Na LV, a resposta imune celular é suprimida favorecendo a replicação do parasito nos macrófagos e a exacerbação da doença. Estudos apontam que esta supressão pode estar relacionada à secreção da interleucina-10 (IL-10), pois esta tem o papel de regular o excesso de resposta inflamatória, inibindo a produção de IL-12. OBJETIVO: Nesta pesquisa, propõese produzir e purificar plasmídeos codificando receptor de IL-10 e IL-12 murinos, bem como produzir e purificar o receptor de IL-10 murino na forma solúvel no sistema baculovíruscélulas de inseto, visando avaliar os efeitos de substâncias imunomoduladoras em camundongos infectados com Leishmania infantum/chagasi, com o intuito de desenvolver um método imunoterápico para cães com LV. METODOLOGIA: Na primeira parte deste trabalho, camundongos BALB/c foram infectados com L. infantum/chagasi, por via venosa e em seguida foram injetados quatro vezes, com intervalo de 7 dias entre as doses, com salina (G1), pcDNA3.1 (plasmídeo controle) (G2), pcDNA3.1mIL-12 (G3), pcDNA3.1mIL-10R1 (G4) e pcDNA3.1mIL-12+ pcDNA3.1mIL-10R1 (G5), por via intramuscular, seguida de eletroporação. Os efeitos da administração dos plasmídeos foram avaliados através da análise histológica do fígado e baço e pela determinação da carga parasitária do baço por PCR em tempo real. Na segunda parte deste trabalho foi produzida e purificada através do sistema baculovírus-célula de inseto, a proteína rmusIL-10R1. Além disso, foi realizado o ensaio de atividade biológica em células MC/9 para avaliar se a proteína produzida e purificada possui atividade funcional. RESULTADOS: A administração de plasmídeos codificadores do receptor de IL-10R1 em associação com IL-12 seguida de eletroporação apresentou efeitos sistêmicos nos grupos G3 e G5, como presença de granulomas maduros no parênquima hepático e nos espaços portais, intenso infiltrado inflamatório no parênquima hepático, aumento do centro germinativo no tecido esplênico e redução da carga parasitária. O rendimento obtido da proteína produzida e purificada foi de 678 µg por litro de cultivo. CONCLUSÃO: Os efeitos observados na primeira parte do trabalho podem ser atribuídos somente à ação da IL-12 e não do receptor de IL-10. Na segunda etapa do trabalho evidenciou-se que a proteína rmusIL-10R1 não foi capaz de bloquear a sinalização mediada por IL-10 murina

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is an infectious-parasitic disease and is considered neglected, according to the World Health Organization. The dog and the man are part of maintaining the cycle of infection. The increasing numbers of infected animals have a public health problem, as it represents an imminent risk of infection for humans. In LV, the cellular immune response is suppressed favoring the replication of the parasite in the macrophages and the exacerbation of the disease. Studies indicate that this suppression may be related to the secretion of interleukin-10 (IL-10), since it has the role of regulating the excess inflammatory response, inhibiting the production of IL12. PURPOSE: In this research, it is proposed to produce and purify murine IL-10 and IL-12 receptor encoding plasmids, as well as to produce and purify the murine IL-10 receptor in the soluble form of the baculovirus-insect cells system, in order to evaluate the effects of immunomodulatory substances in mice infected with Leishmania infantum / chagasi, with the aim of developing an immunotherapeutic method for dogs with VL. METHODOLOGY: In the first part of this work, BALB / c mice were infected with venom intravenous L. infantum and then injected four times, with 7 days between doses, with saline (G1), pcDNA3.1 (G2), pcDNA3.1mIL-12 (G3), pcDNA3.1mIL-10R1 (G4) and pcDNA3.1mIL-12 + pcDNA3.1mIL-10R1 (G5), followed by electroporation. The effects of plasmid administration were assessed by histological analysis of the liver and spleen and determination of spleen parasite load by real-time PCR. In the second part of this work the rmusIL-10R1 protein was produced and purified through the baculovirus-insect cell system. In addition, the biological activity assay was performed on MC / 9 cells to assess whether the produced and purified protein has functional activity. RESULTS: Administration of IL-10R1 receptor-encoding plasmids in association with IL-12 followed by electroporation showed systemic effects in the G3 and G5 groups, such as presence of mature granulomas in the hepatic parenchyma and portal spaces, intense inflammatory infiltrate in the hepatic parenchyma , increase of the germinal center in the splenic tissue and reduction of the parasitic load. The yield of the produced and purified protein was 678 µg per liter of culture. CONCLUSION: The effects observed in the first part of the work can be attributed only to the action of IL-12 and not the IL-10 receptor. In the second stage of the work it was shown that the rmusIL-10R1 protein was not able to block murine IL-10 mediated signaling.

Aspectos clínicos e laboratoriais associados ao óbito na leishmaniose visceral / Clinical and laboratory aspects associated with death in visceral leishmaniasis

A leishmaniose visceral (LV) é grave problema de saúde pública no Brasil, onde permanece com elevadas taxas de letalidade a despeito das tentativas de controle. OBJETIVO: Identificar aspectos clínicos e laboratoriais admissionais associados ao óbito na LV. MATERIAIS E MÉTODOS: trata-se de estudo de corte transversal retrospectivo incluindo os pacientes admitidos no Hospital Couto Maia (Salvador/Ba) com diagnóstico de LV entre janeiro de 2010 e dezembro de 2014. Variáveis epidemiológicas, clínicas e laboratoriais admissionais foram coletadas em instrumento padronizado e analisadas no software Stata® versão 13.0 na comparação entre os grupos de desfecho clínico (DC) de alta hospitalar (n=106) ou óbito (n=12). RESULTADOS: Predominaram pacientes do sexo masculino (62,7%), da faixa etária pediátrica (53,4%), de procedência da área urbana de municípios do interior da Bahia com baixo Índice de Desenvolvimento Humano e de apresentação clínica clássica com hepatoesplenomegalia febril e citopenias. A letalidade média foi de 10,2%, superior a partir dos 40 anos de idade. As principais causas de óbito declaradas foram insuficiências renal e hepática/hepatite, sepse/choque séptico, choque não especificado e coagulação intravascular disseminada. Comorbidades ocorreram em 19,5% dos pacientes e foram associadas ao DC óbito (p=0,043), assim como a presença de dor abdominal (p=0,022), sangramentos mucosos (p=0,034), edema (p=0,029), icterícia (p=0,000), redução do sensório (p=0,001), crepitação pulmonar (p=0,014), bulhas arrítmicas (p=0,027), coinfecção bacteriana (p=0,019) e alterações eletrocardiográficas (p=0,001). Apresentaram associação óbito níveis de plaquetas < 81.000/mm³ (p=0,004), albumina ≤ 2,2g/dL (p=0,032), ureia > 37 mg/dL (p=0,009), bilirrubinas totais > 0,9 mg/dL (p=0,001), bilirrubina direta > 0,4mg/dL (p=0,002), atividade de protrombina ≤ 45% (p=0,008) e creatinina elevada para a idade (p=0,003). Os escores obtidos nos modelos prognósticos clínico (EC) e clinicolaboratorial (ECL) adotados pelo Ministério da Saúde do Brasil apresentaram concordância com o DC; EC ≥ 4 e ECL ≥ 6 foram significativamente associados ao óbito nesta amostra, com maior força de associação para o último (p=0,000). CONCLUSÕES: O perfil clínico da amostra foi concordante com a literatura, porém algumas variáveis classicamente associadas ao óbito na LV não se mostraram significantes, ou se fizeram em diferentes pontos de corte, o que pode ter se devido a variações populacionais ou ao delineamento do estudo, requerendo pesquisas mais robustas para a sua verificação. Os resultados para as pontuações nos EC e ECL nesta amostra refletem a importância de sua realização enquanto ferramenta de estratificação de risco dos pacientes diagnosticados com LV. Espera-se que este estudo possa contribuir no diagnóstico situacional da doença na população local e na identificação de questões-chave a serem aprofundadas através de diferentes metodologias

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is a major public health problem in Brazil, where it persists with elevated fatality rates despite of controlling measures. AIM: Identify clinical and laboratorial admission aspects associated to death in VL. MATERIAL AND METHODS: It's a cross-sectional retrospective study including patients admitted to the Hospital Couto Maia (Salvador/Ba) with a diagnosis of VL between January 2010 and December 2014. Epidemiological, clinical and laboratory admission variables were collected in a standardized instrument and analyzed in the software Stata ® version 13.0 in the comparison between groups of clinical outcome (CO), discharge (n=106) or death (n=12). RESULTS: predominated male patients (62.7%), pediatric age (53.4%), origin of the urban area of municipalities in the interior of Bahia with low Human Development Index and classical clinical presentation with hepatosplenomegaly feverish and cytopenias. The average fatality rate was 10.2%, higher than 40 years of age. The main declared causes of death were renal and liver insufficiencies/hepatitis, sepsis/septic shock, unspecified shock and disseminated intravascular coagulation. Comorbidities were referred in 19.5% of patients and was associated with the CO (p=0.043), as well as the presence of abdominal pain (p=0.022), mucosal bleeding (p=0.034), edema (p=0.029), jaundice (p=0.000), sensory reduction (p = 0.001), lung crepitation (p=0.014), arrhythmic cardiac sounds (p=0.027), bacterial coinfection (p=0.019) and electrocardiographic abnormalities (p=0.001). Presented death association platelet levels < 81,000/mm ³ (p=0.004), serum albumin ≤ 2, 2 g/dL (p=0.032), urea > 37 mg/dL (p=0.009), total bilirubin > 0.9 mg/dL (p=0.001), direct bilirubin > 0, 4 mg/dL (p=0.002), prothrombin activity < 45% (p=0.008) and serum creatinine elevated to the age (p=0.003). The scores obtained in clinical (CP) and clinicolaboratorial (CLP) predictor models adopted by the Ministry of Health of Brazil showed agreement with the CO; CP ≥ 4 and CLP ≥ 6 were significantly associated with death in this sample, with greater strength of association for the last (p=0.000). CONCLUSIONS: the clinical profile of the sample was concordant with the literature, though some variables classically associated with death in VL showed no significant, or if made in different cut-offs, which may be due to population variations or study design, requiring more robust research for verification. The results for the CP and CLP scores in this sample reflect the importance of their achievement as a risk stratification tool of patients diagnosed with VL. It is hoped that this study will help in situational diagnosis of the disease in local population and in the identification of key issues to be deepened through different methodologies

Protection mediated by chemokine CXCL10 in BALB/c mice infected by Leishmania infantum

BACKGROUND Visceral leishmaniasis (VL) caused by Leishmania infantum is characterised by the loss of the ability of the host to generate an effective immune response. Chemokines have a direct involvement in the pathogenesis of leishmaniasis, causing a rapid change in the expression of these molecules during infection by Leishmania. OBJECTIVES Herein, it was investigated the role of CXCL10 in controlling infection by L. infantum. METHODS RAW 264.7 macrophages were infected with L. infantum in vitro and treated or not with CXCL10 (25, 50 and 100 ng/mL). Parasite load, as well as nitric oxide (NO), IL-4 and IL-10 production were assessed at 24 and 48 h after infection. In vivo, BALB/c mice were infected and treated or not with CXCL10 (5 μg/kg) at one, three and seven days of infection. Parasite load, IFN-g, IL-4, TGF-β and IL-10 were evaluated one, seven and 23 days post treatment. FINDINGS In vitro, CXCL10 reduced parasitic load, not dependent on NO, and inhibited IL-10 and IL-4 secretion. In vivo, CXCL10 was able to reduce the parasite load in both liver and spleen, four weeks after infection, representing a higher decrease in the number of parasites in these organs, also induced IFN-γ at day 23 after treatment, correlating with the decrease in parasite load, and reduced IL-10 and TGF-β. MAIN CONCLUSIONS This study suggests a partial protective role of CXCL10 against L. infantum, mediated by IFN-g, not dependent on NO, and with suppression of IL-10 and TGF-β. These data may provide information for the development of new approaches for future therapeutic interventions for VL.

T lymphocytes and macrophages in the intestinal tissues of dogs infected with Leishmania infantum / Linfócitos T e macrófagos nos tecidos intestinais de cães infectados com Leishmania infantum

Abstract This study was about a semi-quantitative analysis of T lymphocytes (CD4+ and CD8+, FoxP3+ regulatory T cells), and macrophages in the gut wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Thirteen dogs were divided into three groups: group 1 (G1, n=5), dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) and infected with L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=5), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). There was no significant difference (p ≥ 0.05) on CD4+ and Treg cell numbers among the groups, whereas the levels of CD8+ T cells and macrophages were significantly higher in dogs from G1 group than in G2 and G3 (p ≤ 0.05), especially in intestinal segments with high parasite burden. Parasite burden correlated positively with levels of CD8+ T cells and macrophages (p ≤ 0.05), but was inversely correlated to levels of CD4+ T lymphocytes and FoxP3+ Treg cells. In conclusion, in the intestine of dogs with CVL, the increase of CD8+ T cells and macrophages population associated with high parasite burdens, but no changes of CD4+ T cells and FoxP3+ Treg cells suggest a possible immunoregulation by the parasite not dependent on Treg cells.

Resumo Este estudo foi uma análise semi-quantitativa de linfócitos T (CD4+, CD8+ e regulatórios - Treg FoxP3+) e macrófagos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum. Treze cães foram divididos em três grupos: grupo 1 (G1, n=5) continha cães com leishmaniose visceral canina (LVC) e com amastigotas intestinais; grupo 2 (G2, n=5) continha cães com LVC, mas sem amastigotas intestinais e o grupo 3 (G3, n=3) continha cães não infectados (grupo controle). Verificou-se que não houve diferença significativa (p ≤ 0.05) no número de células CD4+ e de Treg entre os grupos, mas o número de células T CD8+ e macrófagos foi significativamente superior nos cães do grupo G1 em relação ao G2 e ao G3 (p ≤ 0,05), especialmente nos segmentos intestinais com altas cargas parasitárias. As altas cargas parasitarias correlacionaram positivamente com os números de CD8+ e macrófagos (p ≤ 0,05), mas negativamente com as células CD4+ e Treg. Em conclusão, no intestino dos cães com LVC, o aumento das populações de células T CD8+ e de macrófagos associado a altas cargas parasitárias, mas nenhuma alteração de células T CD4+ e células Treg FoxP3+ sugerem uma possível imunorregulação pelo parasita não dependente de células Treg.

Risk factors associated with seropositivity for Leishmania spp. and Trypanosoma cruzi in dogs in the state of Paraiba, Brazil / Fatores de risco associados às soropositividades para Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi em cães no Estado da Paraíba, Brasil

Abstract The aim of this survey was to determine the seropositivity and risk factors forLeishmania spp. and Trypanosoma cruzi in dogs in the State of Paraíba, Northeastern Brazil. A total of 1,043 dogs were tested, and the serological diagnoses of Chagas disease (CD) and canine visceral leishmaniasis (CVL) was performed by the indirect fluorescent antibody test (IFAT). Animals that tested seropositive for both diseases (by IFAT) were further subjected to ELISA. Of the 1,043 dogs 81 (7.8%; 95% CI = 6.1-9.4%) tested seropositive for Leishmania spp., while 83 were seropositive for T. cruzi (7.9%; 95% CI = 6.3-9.6%). Simultaneous serological reactions were detected in 49 animals (4.6%; 95% CI= 3.6-6.2%). Semi-domiciled housing (OR = 2.044), free housing (OR = 4.151), and soil (OR = 3.425) and soil/cement (OR = 3.065) environmental conditions were identified as risk factors for CVL seropositivity. The risk factors identified for CD seropositivity were semi-domiciled (OR = 2.353) or free housing (OR = 3.454), and contact with bovine (OR = 2.015). This study revealed the presence of dogs in the Paraíba State seropositive for CVL and CD, suggesting the need for revisiting and intensification of disease control measures through constant monitoring of the canine population.

Resumo O objetivo do presente trabalho foi determinar a soropositividade paraLeishmania spp. e Trypanosoma cruzi em cães do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, bem como identificar fatores de risco. Foram utilizados 1.043 cães e, para o diagnóstico sorológico de doença de Chagas (DC) e leishmaniose visceral canina (LVC), foi utilizada a reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Animais positivos para ambas as doenças (pela RIFI) foram submetidos ao ELISA. Dos 1.043 cães investigados, 81 foram soropositivos para Leishmania spp., resultando em prevalência de 7,8% (IC 95% = 6,1-9,4%) e, para T. cruzi, 83 (7,9%; IC 95% = 6,3-9,6%) animais foram soropositivos. Quarenta e nove animais (4,6%; IC 95% = 3,6-6,2%) apresentaram sororeatividade mista. Criação semidomiciliar (OR = 2,044), criação solta (OR = 4,151), ambiente de terra (OR = 3,425) e ambiente de terra/cimento (OR = 3,065) foram apontados como fatores de risco para LVC, e criação semidomiciliar (OR = 2,353), criação solta (OR = 3,454) e contato com bovinos (OR = 2,015) para DC. Conclui-se que LVC e DC estão presentes em cães do Estado da Paraíba, o que sugere revisão e intensificação das medidas de controle através do constante monitoramento da população canina.

Avaliação da eficácia de coleiras impregnadas com deltametrina no controle e prevenção da leishmaniose visceral canina em área endêmica / Evaluation of the effectiveness of collars impregnated with deltamethrin in the control and prevention of canine visceral leishmaniasis in endemic area

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose de grande importância na saúde pública, causada pela Leishmania infantum. No Brasil, o parasito é transmitido pela picada do Lutzomyia longipalpis e o cão é considerado o principal reservatório doméstico. As medidas de controle da LV apresentam limitações que comprometem a sua eficácia. Assim, novas estratégias precisam ser implementadas. A utilização de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% têm apresentado resultados promissores na proteção individual de cães contra a picada do vetor flebotomíneo e como medida de controle em regiões endêmicas da Europa. Entretanto, ainda são escassos os estudos de campo que avaliaram a eficácia da utilização da coleira como medida de controle da LV em áreas onde o Lu. longipalpis é o vetor responsável pela transmissão. OBJETIVO: Avaliar a eficácia da utilização de coleiras impregnadas com deltametrina a 4% em cães, no controle e prevenção da leishmaniose visceral canina (LVC) em uma área endêmica do Brasil. MATERIAL E MÉTODOS: Um estudo experimental longitudinal foi realizado em Camaçari - BA...

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonosis of great importance in public health, caused by Leishmania infantum. In Brazil, the parasite is transmitted by the bite of Lutzomyia longipalpis and the dog is considered the main domestic reservoir. The VL control measures have limitations that impair its efficacy. Thus, new strategies need to be implemented. The use of collars impregnated with deltamethrin 4% have shown promising results in personal protection dogs against the bite of the sandfly vector and as a control measure in endemic regions of Europe. However, there are few field studies that evaluated the efficacy of using the collar as LV control measure in areas where Lu. longipalpis is the vector responsible for transmition. OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of using collars impregnated with deltamethrin to 4% in dogs for control and prevention of canine visceral leishmaniasis (CVL) in an endemic area of Brazil. MATERIAL AND METHODS: A longitudinal experimental study was carried out in Camaçari-BA...

Evaluation of 17-AAG as a chemotherapeutic potential for the treatment of visceral leishmaniasis in experimentally infected hamsters / Evaluation of 17-AAG as a chemotherapeutic potential for the treatment of visceral leishmaniasis in experimentally infected hamsters

A leishmaniose é causada por protozoários do gênero Leishmania. Considerada endêmica em diversos países, incluindo o Brasil, o tratamento dessa doença consiste na utilização de agentes quimioterápicos. No entanto, esses fármacos apresentam diversos efeitos colaterais, alto custo e aumento progressivo de falha terapêutica com baixas taxas de cura. Tendo em vista a necessidade para desenvolvimento de novos compostos anti-Leishmania, ensaios realizados anteriormente por nosso grupo evidenciaram o potencial do 17 - allylamino 17 - demethoxygeldanamycin (17-AAG) no tratamento in vivo da leishmaniose cutânea (LC). Esse composto inibe a atividade ATPásica da proteína de choque térmico 90 (HSP90), que no parasito é conhecida por exercer funções essenciais. Como consequência, sua inibição pode levar à morte do parasito, resultando no controle da doença. Assim, nosso estudo avaliou o potencial do 17-AAG no tratamento da leishmaniose visceral (LV) utilizando hamster como modelo experimental. Este modelo foi utilizado, pois apresenta características clínico-patológicas semelhantes às observadas em humanos com calazar. Inicialmente foi realizado um ensaio de toxicidade com o 17-AAG utilizando doses intraperitoneais de 20 ou 40 mg/kg diariamente ou em dias alternados, totalizando quinze aplicações. O esquema terapêutico causou toxicidade no fígado dos animais tratados com ambas às doses e no rim dos animais tratados com 40mg/kg. Todos os animais que receberam 40mg/kg e 80% daqueles que receberam 20mg/kg vieram a óbito no final dos dois esquemas terapêutico. Com o intuito de reduzir a toxicidade e avaliar o potencial leishmanicida do 17-AAG, experimentos subsequentes foram realizados utilizando doses menores de 5 ou 10 mg/kg de 17-AAG em intervalos maiores de três dias, totalizando sete aplicações. Os animais do estudo apresentavam alterações bioquímicas e hematológicas, antes mesmo de iniciar o tratamento, permanecendo com essas alterações durante todos os períodos avaliados, que foram igualmente observadas nos animais do grupo controle não tratados com 17-AAG. Com o intuito de avançar na avaliação de toxicidade e eficácia do tratamento, outro ensaio foi realizado utilizando doses de 10 ou 20 mg/kg de 17-AAG em dias alternados, totalizando sete aplicações. A análise histopatológica mostrou que os hamsters tratados não apresentaram alterações em fígado e rim adicionais às observadas no grupo controle. Esses achados mostram que o tratamento com 17-AAG foi tóxico somente para as células hepáticas dos animais, quando aplicado em doses mais elevadas e em intervalos de tempos curtos. Em doses mais baixas e intervalos maiores, as análises histopatológicas do fígado e rim dos animais revelaram alterações similares às causadas pelo diluente. Quando os hamsters foram tratados com as doses toleradas de 10 ou 20 mg/kg de 17-AAG em dias alternados, o 17-AAG não foi capaz de reduzir a carga parasitária no baço, fígado ou linfonodo desses animais. Em conjunto, esses dados mostram que os hamsters não representam um modelo adequado para teste com 17-AAG, pois os mesmos não toleraram doses elevadas deste fármaco que seriam necessárias para o controle da infecção, indicando a necessidade da utilização de outro modelo experimental nos estudos de tratamento da LV

Contribuição para o desenvolvimento de uma vacina contra leishmaniose visceral canina / Contribution to the development of a vaccine against canine visceral leishmaniasis

A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa e parasitária que se encontra em expansão no Brasil. A espécie que causa a doença no Brasil é a Leishmania infantum. O cão é o principal reservatório do parasita. Uma vacina contra leishmaniose visceral canina (LVC) pode favorecer o controle da doença. Este trabalho tem como objetivo contribuir para o desenvolvimento de uma vacina contra LVC.OBJETIVO: O estudo do primeiro capítulo visou o desenvolvimento de um modelo para a avaliação de antígenos candidatos à vacina contra LVC. METODOLOGIA: Um experimento foi realizado para obtenção de cães resistentes a LVC. Os linfócitos dos animais deveriam ser capazes de reconhecer antígenos otencialmente úteis para o desenvolvimento de uma vacina. Para isso, uma cepa de L.infantum foi isolada de cão naturalmente infectado e doente (Camaçari, Bahia). Seis cães adultos e sadios foram inoculados com 1x108 formas promastigotas em fase estacionária de cultura por via dérmica e acompanhados por dois anos.RESULTADOS: Os animais apresentaram: 1) área de induração e ulceração rasa no local da inoculação do parasita com cura espontânea em um período inferior a três meses, 2) ausência de manifestações clínicas e de alterações hematológicas e bioquímicas séricas, 3) produção baixa e flutuante de anticorpos da classe IgG reativos a antígenos de Leishmania, 4) resposta linfoproliferativa (em 4 de 6 cães) frente a estimulação com antígenos de Leishmania, 5)produção baixa de IFN-γ em um ensaio realizado com sangue total incubado por 24h com antígenos de Leishmania (4 de 5 cães), 6) carga parasitária baixa em aspirado de baço,detectada por PCR em tempo real. CONCLUSÃO: Os animais desenvolveram uma forma subclínica da infecção ao lado de resposta imune humoral e celular fracas.OBJETIVO: No segundo capítulo foi testado um ensaio de avaliação da produção de citocinas por células de sangue de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. O quantiFERON modificado permite a avaliação in vitro e de maneira rápida da produção de citocinas contra Leishmania em animais de área endêmica. METODOLOGIA: Antígeno solúvel e antígenos recombinantes de L. infantum (rLci2-NT-5R-CT e rLci2-NT-CT) foram produzidos e utilizados no ensaio para a estimulação do sangue total de27 cães de área endêmica e não endêmica para LVC por 24h. O plasma foi coletado e a produção das citocinas caninas IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 e TNF-α foram quantificadas. RESULTADO:Devido a problemas técnicos não foi possível avaliar os dados obtidos e,consequentemente,não foi possível caracterizar grupos de animais susceptíveis e resistentes.OBJETIVO: No terceiro capítulo, a carga parasitária e aspectos histológicos em diferentes regiões do baço de cães com LVC foi analisada.METODOLOGIA: A carga parasitária e alterações histológicas no baço de 6 cães com LVC foram avaliados por amostragem de três secções inferior, média e superior do órgão...

INTRODUCTION: Visceral Leishmaniasis (VL) is an infectious parasitic disease which is increasing in Brazil. The species that causes the disease in Brazil is Leishmaniainfantum. The dog is the main reservoir of the parasite. A canine visceral leishmaniasis vaccine (CVL) may favor the control of the disease. This paper aims to contribute to the development of a vaccine against CVL. OBJECTIVE: The first chapter study aimed the development of a model for the evaluation of candidate antigens for a vaccine against CVL. An experiment was conducted to obtain resistant dogs to CVL. Lymphocytes of these animals should be able to recognize potentially useful antigens for a vaccine development. METHODOLOGY: For this, a strain of L. infantum was isolated from naturally infected and sick dog (Camaçari, Bahia). Six dogs and healthy adults were intradermally inoculated with 1 x 108 promastigotes in the stationary phase culture and were followed for two years. RESULTS: The animals showed: 1) induration area and shallow ulceration in parasite inoculation site with spontaneous healing in a period of less than three months, 2) absence of clinical symptoms and hematological and biochemical changes, 3) low and floating production of antibodies IgG reactive to Leishmania antigens, 4) lymphoproliferative response (in 4 of 6 dogs) compared to stimulation with leishmanial antigens, 5) low IFN-γ in a test performed on whole blood incubated for 24 h with antigen Leishmania (4 of 5 dogs), 6) a low parasite load in spleen aspirates, detected by realtime PCR. CONCLUSION: These animals developed a subclinical form of the infection alongside with a weakspecific humoral and cellular immune response and weak cell. OBJECTIVE: The second section was tested in a trial evaluating cytokine production by blood cells of dogs naturally infected with Leishmaniainfantum. The modified QuantiFERON allows evaluation both in vitro and quickly production of cytokines against Leishmania in animals in an endemic area. METHODOLOGY: Soluble antigen and recombinant antigens of L. infantum (rLci2-5R-NT-CT and rLci2-NT-CT) were produced and used in the assay for the stimulation of whole blood of 27 animals from endemic and nonendemic area for LVC for 24h. Plasma was collected and cytokine production of canine IFNγ, IL-2, IL-6, IL-10 and TNF-α cytokines were quantified. RESULTS: Due to technical some problems, it was not possible to characterize groups of animals susceptible and resistant in relation to modified QuantiFERON assay results. OBJECTIVE: In the third chapter, the parasite load and histological aspects in different regions of the spleen of dogs with CVL were analyzed. METHODOLOGY: The parasite load and histological changes in the spleen of 6 dogs with CVL were evaluated by sampling three sections of the spleen (lower, middle and upper section of the organ)...

Antibodies to Leishmania spp. in domestic felines / Anticorpos anti-Leishmania spp. em felinos domésticos

Abstract Leishmaniasis is a vector-borne zoonotic disease caused by protozoa in the genus Leishmania, typical of rural and peri-urban environments. The causative agent of American visceral leishmaniasis is Leishmania (Leishmania) infantum chagasi and the main insect vector in Brazil is Lutzomyia longipalpis. Dogs (Canis familiaris) are important in the transmission of the disease, as a reservoir closely related to humans and an infection source for phlebotomine vectors. Since 1990, an increasing number of feline leishmaniasis cases have been reported, suggesting that domestic cats (Felis catus) might be involved in the epidemiology of the disease. The present study analyzed the prevalence of anti-Leishmania spp. antibodies in naturally infected domestic cats from various neighborhoods in the municipality of Belém, Pará, Brazil, using the indirect immunofluorescence assay (IFA) and the direct agglutination test (DAT). Among the 443 samples tested, 18 (4.06%) presented positive reactions in the IFA. The observed titers were 40 IU in 4.97% of the samples and 80 IU in 0.90%. In the DAT test, positive results were found in 25 (5.64%) of the samples. The observed titers were also 40 IU (4.97%) and 80 IU (0.68%). The agreement rate between the two tests was considered low (Kappa coefficient = 0.10).

Resumo As leishmanioses são zoonoses vetoriais causadas por protozoários do gênero Leishmania, características de ambientes rurais e periurbanos. A leishmaniose visceral americana (LVA) é causada pela Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, cujo principal vetor no Brasil é Lutzomyia longipalpis. O cão (Canis familiaris) possui papel ativo na transmissão da doença, pois é um reservatório muito próximo do humano e uma fonte de infecção para o flebotomíneo. O aumento do número de casos de leishmaniose felina, descritos na literatura a partir de 1990, sugere que gatos também podem atuar na epidemiologia dessa enfermidade. O presente estudo avaliou a prevalência de anticorpos anti-Leishmania spp. em gatos domésticos (Felis catus) de diferentes bairros do Município de Belém, Pará (PA), pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e pelo Teste de Aglutinação Direta (TAD), utilizando-se como ponto de corte o título de 40 UI. Entre os 443 gatos estudados, 18 (4,06%) apresentaram reação sorológica positiva na RIFI. Os títulos observados foram de 40 UI em 0,90%. No TAD, foi encontrada positividade em 25 (5,64%) animais. Os títulos observados foram de 40 UI, em 4,97% dos gatos, e 80 UI, em 0,68%. A concordância entre os testes foi considerada baixa (coeficiente Kappa: 0,10).

Identification and glycobiological characterization of circulating immune complexes in patients with visceral leishmaniasis and post kala azar dermal leishmaniasis.

Here, we investigated the quantitative and qualitative differences in antibody classes and subclasses in serum immune complexes (ICs) of Visceral Leishmaniasis (VL), Post Kala-azar Dermal Leishmaniasis (PKDL) and different cross reactive diseases like Malaria, Leprosy, Vitiligo as compared to control subjects. IC levels were measured through a newly developed PEG ELISA, using L. donovani promastigote membrane antigen coated plate. Antibody classes and subclasses were identified using polyspecific sera and monoclonal antibodies, respectively. ICs were purified using polyethylene glycol (PEG) precipitation. Conditional logistic regression showed an association between IgG1-containing ICs and increased risk of PKDL (OR=75, P <0.05) and an association of IgG-containing ICs with VL (OR=621, P=0.001). PEG ELISA demonstrated almost 13-15 fold higher IgG containing ICs titers in VL as compared to control (P <0.001). The assay further established a significant (P <0.05) difference in the IgG containing ICs titers between VL and PKDL. The isolated ICs were further analyzed by subjecting them to one-dimensional PAGE and subsequently stained with combination of periodic acid schiff (PAS) with silver. A differential banding pattern between VL and PKDL was obtained. Four distinct bands with carbohydrate rich glycoconjugates were identified in PKDL ICs, which were absent in VL and control group. It suggests the scope for developing a novel differential diagnostic assay.

Post-kala-azar dermal Leishmaniasis in two different clinical contexts

In Brazil, visceral Leishmaniasis is caused by Leishmania chagasi. The development of cutaneous lesions in visceral leishmaniasis patients has been described in two different clinical contexts. Patients with compromised immunity can develop skin lesions as a direct consequence of a current visceral disease. Equally, patients with a history of kala-azar and progressive, immune improvement occasionally develop skin lesions as a consequence of immune reconstitution infl ammatory syndrome. These cases manifest in similar fashion to the classic form of post-kala-azar dermal Leishmaniasis. We describe different cases that exemplify these two clinical presentations.

Therapy with radio-attenuated vaccine in experimental murine visceral leishmaniasis showed enhanced T cell and inducible nitric oxide synthase levels, suppressed tumor growth factor-beta production with higher expression of some signaling molecules

Background: Visceral leishmaniasis (VL) or Kala-Azar (KA) is one of the most deadly forms of disease among all neglected tropical diseases. There are no satisfactory drugs or vaccine candidates available for this dreaded disease. Our previous studies showed promising therapeutic and prophylactic efficacy of the live, radio-attenuated parasites through intramuscular (I.M.) and intraperitoneal (I.P.) route in BALB/c mice model. Methods: The T-cell proliferation level, the mRNA expression level of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and tumor growth factor-beta (TGF-β) genes and finally the phosphorylation levels of phosphoinositide dependent kinase 1 (PDK1), phosphoinositide 3 kinase (PI3K) and p38 mitogen activated protein kinase (p38MAPK) molecules were checked in BALB/c mice model immunized with radio-attenuated Leishmania donovani parasites through I.M. route. Results: Higher T-cell proliferation, increased iNOS level, and suppressed TGF-β level were found in treated infected animal groups (100 and 150 Gy) in relation to untreated infected animals. Likewise, phosphorylation levels of PDK1, PI3K and p38MAPK of these two groups were increased when compared to untreated infected controls. Conclusion: The clearance of the parasites from treated infected groups of animals may be mediated by the restoration of T-cell due to therapy with radio-attenuated L. donovani parasites. The killing of parasites was mediated by increase in nitric oxide release through PDK1, PI3K and p38MAPK signaling pathways. A lower TGF-β expression has augmented the restored Th1 ambience in the 100 and 150 Gy treated animal groups proving further the efficacy of the candidate vaccine. .

Avaliação da infecciosidade em cães vacinados com Leish-Tec® (Hertape Saúde Animal S/A) para Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae, Phlebotominae)

O presente trabalho avaliou a transmissibilidade de Leishmania spp. para Lutzomyialongipalpis em 136 cães nativos e beagles-sentinelas, vacinados ou não (placebo) com Leish-Tec® (vacina anti-leishmaniose visceral canina), domiciliados em Porteirinha, município endêmico para leishmaniose visceral, em Minas Gerais. Esses animais foram selecionados a partir da amostra total de cães que compõem o ensaio clínico de fase III que determinou a eficácia da vacina Leish-Tec®, conforme diretrizes estabelecidas pelo Ministério da Saúde do Brasil. Além da técnica de xenodiagnóstico, esses cães também foram submetidos aos testes diagnósticos ELISA, RIFI, teste rápido Kalazar DetectTM e exames de detecção do parasito. Uma tendência de redução da infectividade (p-valor 0,052) foi observada no grupo de cães vacinados com Leish-Tec®que apresentaram resposta sorológica positiva ao antígeno vacinal A2. Os testes RIFI, Kalazar DetectTM e xenodiagnóstico apresentaram maior percentual de positividade entre os cães sintomáticos da amostra (p<0,05), quando comparados aos cães assintomáticos, na análise global.

Na análise estratificada e, para o grupo de cães que recebeu vacina, as diferenças se mantiveram para a RIFI e o teste rápido, mas não para o xenodiagnóstico; já para os cães que receberam placebo, as diferenças entre grupos clínicos se mantiveram para o xenodiagnóstico e teste rápido, mas não para a RIFI. Nossos resultados sugerem que a Leish-Tec® possui potencial de redução da infectividade em cães vacinados e desafiados em área endêmica e que a vacinação com Leish-Tec® pode contribuir para a redução da transmissão da leishmaniose visceral canina, desde que utilizada como medida protetiva individual e em conjunto com as demais estratégias, individuais e coletivas, de prevenção e controle da doença. Com relação à diferença de desempenho dos testes diagnósticos entre grupos clínicos, nossos resultados apontam para a necessidade de desenvolvimento de testes mais eficazes no diagnóstico da infecção assintomática por Leishmania e demonstra que essas diferenças interferem nos resultados e devem ser consideradas na avaliação de ensaios clínicos.

Produção e avaliação de antígenos recombinantes candidatos a componente de uma avaliação contra leishmaniose visceral canina / Production and testing of candidates recombinant antigen component of an assessment against canine visceral leishmaniasis

Uma vacina efetiva contra a leishmaniose visceral (LV) canina pode contribuir para o controle da doença no homem. Visando o desenvolvimento de uma vacina contra LV canina, antígenos recombinantes de L. infantum foram selecionados em nosso laboratório pelo uso de uma mistura de soros de seres humanos ou cães naturalmente infectados pela L. infantum. Alguns destes antígenos foram testados em diversos protocolos de imunização, incluindo uso de diferentes adjuvantes, em camundongos ou cães. A imunização de camundongos ou cães com um dos antígenos recombinantes (rLci2B) usado isoladamente ou em associação com saponina induziu resposta imune Th2 ou Th1/Th2, respectivamente, não protetoras contra a infecção experimental. Com a determinação da sequência deduzida de aminoácidos notou-se que a maioria dos antígenos selecionados apresenta um segmento com sequência de aminoácidos única (domínio não repetitivo) e segmentos com sequência de aminoácidos com motivos repetitivos (domínios repetitivos).Possivelmente a incapacidade dos antígerecombinantes de induzir uma resposta imune predominantemente Th1, protetora contra a LV, seria por conta da presença de domínios repetitivos, que favorecem a apresentação antigênica por linfócitos B e, consequentemente, estimulam uma resposta imune Th2. Para avaliar o direcionamento da resposta imune pelos dois tipos de domínio, novas construções de DNA foram concebidas de modo a codificar apenas domínio(s) não repetitivo(s) ou domínio(s) não repetitivo(s) e domínios repetitivos.OBJETIVOS: Produzir quatro proteínas recombinantes com domínios não repetitivos (rLci2-NT-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT e rLci12-NT-CT) e avaliar a capacidade desses polipeptídios de induzir resposta imune celular in vitro em cães assintomáticos inoculados por via dérmica com L. infantum. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram realizadas: a)a subclonagem de construções de DNA (Lci3-NT-CT, Lci10-NT e Lci12-NT-CT) em um plasmídeo apropriado para expressão em Escherichia coli, b) a determinação de condições apropriadas para produção das proteínas recombinantes (rLci2-NT-5R-CT, rLci2-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT-2R e rLci10-NT) c) a purificação das proteínas recombinantes por cromatografia de afinidade e d)avaliação da capacidade dos polipeptídios de induzir estimulação de células mononucleares sangue periférico (PBMC) de cães assintomáticos inoculados por via dérmica com L.infantum. RESULTADOS:Três (rLci2-NT-CT, rLci2-NT-5R-CT, rLci3-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci10-NT e rLci10-NT-2R) dos quatro pares de polipeptídios recombinantes foram expressos, produzidos e purificados. Três antígenos recombinantes (rLci2-NT-5R-CT,rLci2-NT-CT e rLci3-NT-2R-CT) promoveram a linfoproliferação in vitro utilizando PBMC de cães assintomáticos inoculados por via dérmica com L. infantum CONCLUSÕES: Três das seis proteínas produzidas induziram a linfoproliferação, sendo a maior linfoproliferação encontrada para PBMC estimulado com a proteína sem domínios repetitivos (rLci2-NT-CT). Avaliações adicionais são necessárias para comprovar a utilidade destas moléculas em formulação de vacina contra leishmaniose visceral canina.

An effective vaccine against visceral leishmaniasis (VL) dog can help to control the disease in man. Aiming at development of a vaccine against canine VL, recombinant antigens of L. infantum were selected in our laboratory by using a mixture of sera from humans or dogs naturally infected with L. infantum. Some of these antigens were tested in different immunization protocols, including use of different adjuvants in mice or dogs. The immunization of mice or dogs with a recombinant antigens (rLci2B) used alone or in combination with saponin induced Th2 response or Th1 / Th2, respectively, did not protective against experimental infection. With the determination of the deduced amino acid sequence it was noted that most of the antigens selected segment has a unique amino acid sequence (non-repetitive domain) and segments of amino acid sequence with repetitive motifs (repetitive domains). Possibly the inability of recombinant antigens to induce an immune response predominantly Th1 protective against LV would be due to the presence of repetitive domains that promote antigen presentation by B cells and thus stimulate an immune response Th2. To assess the direction of the immune response by two types of domain, new DNA constructs were designed to encode only the domain (s) not repetitive (s) or domain (s) not repetitive (s) and repetitive fields. MATERIALS AND METHODS: Were performed: a) subcloning DNA constructs (rLci3-NT-CT, rLci10-NT and rLci12-NT-CT) into a suitable plasmid for expression in Escherichia coli, b) determining the appropriate conditions for the production of proteins recombinant (rLci2NT-5R-CT, rLci2-NT-CT, rLci3-NT-2R-CT, rLci3-NT-CT, rLci10-NT-2R and rLci10-NT) c) purification of recombinant proteins by chromatography affinity d) evaluating the ability of polypeptides rLci2-NT-CT, rLci3-NT-CT and rLci10-NT to induce stimulation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy dogs inoculated dermal with L. infantum...

DISTINCT CELLULAR MIGRATION INDUCED BY Leishmania infantum chagasi AND SALIVA FROM Lutzomyia longipalpis IN A HEMORRHAGIC POOL MODEL / Migração celular distinta induzida por Leishmania infantum chagasi e saliva de Lutzomyia longipalpis em um modelo de pool hemorrágico

Recruitment of a specific cell population after Leishmania infection can influence the outcome of the disease. Cellular migration in response to Leishmania or vector saliva has been reported in air pouch model, however, cellular migration induced by Leishmania associated with host's blood and vector saliva in this model has not been described. Herein we investigated cellular migration into air pouch of hamster after stimulation with combination of L. chagasi and host's blood and Lutzomyia longipalpis saliva. Migration induced by saliva was 3-fold more than those induced by L. chagasi alone. Additionally, L. chagasi associated with blood and saliva induced significantly even more leukocytes into air pouch than Leishmania alone. L. chagasi recruited a diverse cell population; however, most of these cells seem to have not migrated to the inflammatory exudate, remaining in the pouch lining tissue. These results indicate that L. chagasi can reduce leukocyte accumulation to the initial site of infection, and when associated with vector saliva in the presence of blood components, increase the influx of more neutrophils than macrophages, suggesting that the parasite has developed a strategy to minimize the initial inflammatory response, allowing an unlimited progression within the host. This work reinforces the importance of studies on the salivary components of sand fly vectors of leishmaniasis in the transmission process and the establishment of the infection.

O recrutamento de uma população de células específicas após infecção por Leishmania pode influenciar o resultado da doença. A migração celular em resposta a Leishmania ou saliva do vetor tem sido reportada utilizando o modelo da bolsa de ar subcutânea, entretanto, a migração celular induzida por Leishmania associada com o sangue do hospedeiro e saliva do vetor neste modelo ainda não foi descrita. Neste trabalho foi investigada a migração celular no modelo da bolsa de ar subcutânea em hamster após a estimulação com a combinação de L. chagasi, sangue do hospedeiro e saliva de Lutzomyia longipalpis. A migração induzida por saliva foi três vezes maior do que a induzida por L. chagasi sozinha. Adicionalmente, L. chagasi associada com sangue e saliva induziu significativamente ainda mais leucócitos no exsudato inflamatório do que o estímulo com Leishmania sozinha. L. chagasi recrutou uma população de células distintas, no entanto, a maioria dessas células parece não ter migrado para o exsudato inflamatório, permanecendo no tecido da bolsa de ar. Estes resultados indicam que L. chagasi pode reduzir o acúmulo de leucócitos para o local inicial da infecção e que quando associada à saliva do vetor e na presença de componentes do sangue aumenta o influxo de mais neutrófilos do que macrófagos, sugerindo que o parasito desenvolveu uma estratégia para minimizar a resposta inflamatória inicial, permitindo uma progressão ilimitada dentro do hospedeiro. Este trabalho reforça a importância de mais estudos sobre os componentes da saliva dos vetores das leishmanioses no processo de transmissão e no estabelecimento da infecção.

Detection of antibodies against Leishmania infantum in cats (Felis catus) from the State of Pernambuco, Brazil

Introduction: Little information is available concerning infection by Leishmania infantum in cats. Therefore, the aim of this study was to perform a serological study in domestic cats. Methods: Serum samples (n=153) obtained from animals living in the Cities of Recife and Petrolina, State of Pernambuco, Brazil, were tested by ELISA/S7® (Biogene). Results: Anti-L. infantum antibodies were detected in 3.9% (6/153) of the cats. All seroreagent animals were from Petrolina. Conclusions: These results serve as an important alert, and future studies are needed to better understand the possible role of cats in the epidemiology of visceral leishmaniasis (VL) in this area. .

Isotipos de anticorpos anti-leishmania no soro e expressão de citocinas no baço de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum / Isotypes of anti-leishmania antibodies in serum and cytokine expression in the spleen of dogs naturally infected with Leishmania infantum

Neste estudo foi analisada a distribuição de isotipos de imunoglobulinas IgG1, IgG2 e IgE envolvidas na resposta a Leishmania no soro e a expressão de mRNA para IFN-g e IL-4 in situ no baço de cães naturalmente infectados com L.infantum com diferentes perfis de susceptibilidade ou resistência à doença. A atividade sérica de anticorpos do isotipo IgG1 contra Leishmania tendeu a ser maior nos animais com teste cutêneo da Leishmanina negativo e com parasitismo esplênico (grupo infectado potencialmente susceptível, 0,424±0,401) que nos outros grupos: com teste cutêneo da Leishmanina positivo e ausência de parasitismo esplênico (grupo infectado potencialmente resistente, 0,226±0,114), ou com ambos teste cutêneo da Leishmanina e cultura esplênica positivos (grupo em fase indeterminada da doença, 0,234±0,125) ou com ambos os parâmetros negativos (grupo potencialmente não infectado, 0,159±0,044). Essa diferença não foi, contudo estatisticamente significante (ANOVA, P=0,1450). IgG2 específica anti-Leishmania foi maior (ANOVA P=0,0001)...

We analyzed the distribution immunoglobulin isotypes IgG1, IgG2 and IgE involved in the response to Leishmania and the mRNA expression for IFN-g and IL-4 in situ in the spleen of dogs naturally infected with IgG1 antibody anti-Leishmania serum activity was higher in animals with negative Leishmanin skin test and splenic parasitism (infected and potencially susceptible to VL group, 0,424±0,401) than in other groups: positive Leishmanin skin test and negative splenic parasitism (infected and potentially resistant to VL group, 0,226±0,114), or both positive Leishmanin skin test and slpenic parasitism (infected with undefined susceptibility status group, 0234±0,125) or both negative parameters (non-infected group, 0159±0,044). This difference however was not statistically significant (ANOVA, P=0145)...